（一）亮發(fā)光桿菌單染色法  只應(yīng)用一種染料進(jìn)行染色的方法，如美藍(lán)染色法。
美藍(lán)染色法：在已干燥、固定好的抹片上，滴加適量的（足夠覆蓋抹片點(diǎn)即可）美藍(lán)染色液，經(jīng)1～2分鐘，水洗，瀝去多余的水分，吸干或烘干（不能太熱），然后鏡檢。
（二）復(fù)染色法  應(yīng)用兩種或兩種以上的染料或再加助染劑進(jìn)行染色的方法。染色時(shí)，有些是將染料分別先后使用，有些則同時(shí)混合使用，染色后不同的細(xì)菌和物體或者細(xì)菌結(jié)構(gòu)的不同部分，可以呈現(xiàn)不同顏色，有鑒別細(xì)菌的作用，又可稱為鑒別染色，如革蘭氏染色法，抗酸染色法，瑞特氏染色法和姬姆薩氏染色法等。
1．革蘭氏染色法
（1）在已干燥，固定好的抹片上，滴加草酸銨結(jié)晶紫染色液，經(jīng)1～2分鐘，水洗。
（2）加革蘭氏碘液于抹片上媒染，1～3分鐘，水洗。
（3）加95％酒精于抹片上脫色，約30秒至1分鐘，水洗。
（4）加10倍稀釋石炭酸復(fù)紅液復(fù)染1～2分鐘，水洗。
（5）吸干或烘干，鏡檢。革蘭氏陽性細(xì)菌呈藍(lán)紫色，革蘭氏陰性細(xì)菌呈紅色。
2．抗酸染色法
（1）在已干燥，固定好的抹片上滴加較多量的石炭酸復(fù)紅染色液，將玻片置酒精燈火焰上緩緩加熱，至產(chǎn)生蒸汽即止（不要煮沸），維持微微產(chǎn)生蒸汽，經(jīng)3～5分鐘，水洗。
（2）用3％鹽酸酒精脫色，直至標(biāo)本無顏色脫出為止，充分水洗。
（3）用美藍(lán)染色液復(fù)染約1分鐘，水洗。
（4）吸干或烘干，鏡檢。抗酸性細(xì)菌呈紅色，非抗酸性細(xì)菌呈藍(lán)色。
3．瑞特氏染色法
抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，為了避免很快變干，染色液可稍多加些，或者看情況補(bǔ)充滴加，經(jīng)1～3分鐘，加約與染液等量的中性蒸餾水或磷酸鹽緩沖液，輕輕晃動(dòng)玻片，使與染液混勻，經(jīng)3分鐘左右，直接用水沖洗（不可先將染液傾去），吸干或烘干，鏡檢。細(xì)菌染成藍(lán)色，組織、細(xì)胞等呈其他顏色。
4．姬姆薩氏染色法
（1）于5ml新煮過的中性蒸餾水中滴加5～10滴姬姆薩氏染色液原液，即稀釋成為常用的姬姆薩氏染色液。
（2）抹片經(jīng)甲醇固定并干燥后，在其上滴加足量的染色液或?qū)⒛ㄆ胧⒂腥旧旱娜旧字校旧?0分鐘，或染色數(shù)小時(shí)至24小時(shí)，取出水洗，吸干或烘干，鏡檢。細(xì)菌呈藍(lán)青色，組織、細(xì)胞等呈其他顏色。視野常呈淡紅色。
5．莢膜染色法
（1）涂片、干燥  同單染色法。
（2）固定  滴加甲醇液于涂抹面上，固定2～3分鐘。
（3）水洗  傾去甲醇液，用水輕沖洗。
（4）染色  滴加堿性美蘭染色液數(shù)滴于涂抹面上，染色2～3分鐘。
（5）水洗  傾去染色液，用水輕沖洗。
（6）干燥，鏡檢  菌體染成藍(lán)色，莢膜染成粉紅色或無色。
莢膜染色的原理：莢膜染色主要用于炭疽桿菌病料的莢膜檢查。因?yàn)樘烤覘U菌莢膜系由d-谷氨酸組成的多肽所構(gòu)成，而菌體的主要成分則為核蛋白，因二者著色力不同，染色水洗后，則可把莢膜上一部分染料沖洗掉，顏色變淡，故顯微鏡檢查時(shí)，在著色較深的菌體周圍看到一圈呈淡紫色的膜，即莢膜。又因堿性美蘭是一種多染性染料，故菌體染為藍(lán)色，莢膜則染成淡薔薇色。
6．亮發(fā)光桿菌芽胞染色法
（1）將有芽胞的材料作涂片、干燥、固定。
（2）將5％孔雀綠水溶液滴加于固定好的涂片上。
（3）用木夾夾住載玻片在酒精燈火焰上加熱，使染料冒蒸汽（但不能煮沸），切勿使染料蒸干，必要時(shí)可添加少許染料。加熱時(shí)間從冒蒸汽時(shí)開始計(jì)算約4～5分鐘。
（4）傾去染色液，待玻片冷卻后水洗至孔雀綠不再退色為止。
（5）用0.5％沙黃水溶液復(fù)染1分鐘，水洗。
（6）干燥或烘干后，置油鏡觀察，芽胞呈綠色，菌體呈紅色。
7．鞭毛染色法之一
（1）涂片  取10～12小時(shí)的幼齡培養(yǎng)菌，用1％福爾馬林水溶液制成菌液，在37℃溫箱中固定24小時(shí)，涂抹于載玻片上。
（2）自然干燥，不固定。
（3）用下述染色液加溫染色30秒到1分鐘，然后靜置1～2分鐘。
（4）染色液配制
①0.5％苦味酸水溶液（加溫溶解后過濾）1.0ml。
②20％鞣酸水溶液（加溫溶解，不過濾）1.0ml。
③5％鉀明礬水溶液（加溫溶解后過濾）0.5ml。
④10％復(fù)紅酒精溶液（配制后7天過濾）0.5ml。
上述染色液在用前，按①、②、③、④的順序混合后，即可使用（染色液現(xiàn)配現(xiàn)用）。
（4）水洗、干燥、鏡檢。
（5）結(jié)果  菌體呈深紅色，鞭毛呈淡紅色。
8．鞭毛染色之二
（1）脫脂玻片的準(zhǔn)備  要用新的或表面沒有磨損痕跡的玻片。先用洗衣粉煮10～15分鐘，取出玻片用清水洗凈，再放入洗滌液中浸泡24小時(shí)左右，取出后，用自來水和蒸餾水洗凈，再用95％酒精脫脂，用火焰燒去酒精，即可使用。如不立即使用，可在脫脂后放于干凈的盒中，或浸泡于95％酒精中，用前在火焰上燒去酒精，冷卻后使用。
（2）菌種  應(yīng)用有冷凝水的新制瓊脂斜面接種，培養(yǎng)10～12小時(shí)應(yīng)用。如所用菌種久未移植，在這種斜面上每天移植一次，連續(xù)移植2～3次后使用。
（3）染色液的配制
甲液： 
單寧酸            5g
FeCl3             1.5g
蒸餾水            100ml
15％福爾馬林      2.0ml
1％NaOH          1.0ml
配好后，當(dāng)天使用，次日效果差，第3天則不好用。
乙液： 
AgNO3      2g
蒸餾水      100ml
待AgNO3溶解后，取出10ml備用，再向余下的90mlAgNO3中滴入濃氨水，使之成為很濃的氫氫化銀，再繼續(xù)滴加氨水變?yōu)橥该?，直到重新形成的沉淀物又剛剛?cè)芙鉃橹?。再將備用?0ml AgNO3慢慢滴入，則出現(xiàn)薄霧，但輕輕搖動(dòng)后，薄霧狀沉淀又消失，再滴入AgN03，直到搖動(dòng)后仍呈現(xiàn)輕微而穩(wěn)定的薄霧狀沉淀為止。如所呈薄霧不重，即可使用，此染劑可使用一周。如霧過重、則銀鹽被沉淀出，不宜使用。
（4）染色方法  在載玻片一端加蒸餾水一滴，再用接種環(huán)釣取少量細(xì)菌于水滴中沾幾下，將載玻片傾斜，使水滴流到另一端，然后將載玻片稍斜或平放，在空氣中干燥后，在涂片上滴加甲液染色2～4分鐘，用蒸餾水沖洗，將殘水甩干，或用乙液沖去水后，再加乙液染色30～60秒鐘，然后用蒸餾水沖洗，在空氣中晾干，鏡檢。如未見鞭毛，應(yīng)在整個(gè)涂片上多找?guī)讉€(gè)視野，有時(shí)只在部分涂片上染出鞭毛來。如加乙液后，將載玻片在酒精燈上稍加熱，使其微冒蒸汽且不干，則效果更好。
9．立克次氏體染色法
（1）涂片  以病料制成涂片。
（2）干燥、微加溫固定。
（3）染色  滴加0.25％堿性復(fù)紅水溶液（染色液調(diào)至pH7.2～7.4），用濾紙過濾,染色4分鐘。
（4）脫色  用0.5％枸櫞酸把多余的染色液洗脫掉。
（5）水洗
（6）復(fù)染  1％美蘭水溶液復(fù)染數(shù)秒鐘。
（7）水洗、干燥、鏡檢。
（8）亮發(fā)光桿菌結(jié)果  立克次氏體呈紅色，其他組織細(xì)胞呈藍(lán)色。